无菌室内的污染源，主要来自于无菌室内必要的操作人员和部分工艺设备，通常无菌室内操作人员的四周区域是洁净度差的区域，也是无菌技术中重要的控制内容。
无菌室净化工程特点要求：
1、无菌室应完全封闭，进出无菌室至少要经两道门，中间隔有缓冲间，无菌室与外间设置一个可开闭的窗口，用于传递器具。
2、无菌室必须保持整洁。工作人员进入无菌室应换鞋、衣。无菌室使用前须用紫外线30min，操作结束后清洁台面，再用紫外线30min。
3、无菌室仅用于培养基分装等无菌操作，不能进行有菌标本的操作。操作人员操作时应严格关门并戴好的口罩与帽子。
4、无菌室内应有空气过滤装置，并安装空调。

无菌室的消菌
（1）薰蒸：这是无菌室的措施。无菌室使用了较长时间，污染比较严重时，应进行薰蒸。
（2）喷雾：在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微尘飞场，并有作用。可用5%石炭酸喷雾。
（3）紫外线照射：在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的效果。通常应开启紫外线灯照射30～60min。

无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点：
1、无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气。内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。
2、内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台远的位置上；外间的门好也用拉门，要设在距内间远的位置上。
3、在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。
4、无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台远的位置），好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。

无菌室工作规程
（1）无菌室。每次使用前开启紫外线灯照射30min以上，或在使用前30min，对内外室用5%石炭酸喷雾。
（2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室换上已的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液将手浸洗2分钟。
（3）将各种需用物品搬进内室清点、位，用5%石炭酸在工作台面上方和操作员站位空间喷雾，返回外室，5～10min后再进内室工作。
（4）接种操作前，用70%酒精棉球擦手；进行无菌操作时，动作要轻缓，尽量减少空气波动和地面扬尘。
（5）工作中应注意。如遇棉塞着火，用手紧握或用湿布包裹熄灭，切勿用嘴吹，以免扩大燃烧；如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时，应用浸润5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸润5%石炭酸的抹布擦拭台面或地面，用酒精棉球擦手后再继续操作。
（6）工作结束，立即将台面收拾干净，将不应在无菌室存放的物品和废弃物全部拿出无菌室后，对无菌室用5%石炭酸喷雾，或开紫外线灯照射30min。
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